Nature Methods：PF555——突破活细胞成像的光漂白瓶颈，开启长时程追踪新纪元

近年来，活细胞成像技术的迅猛发展为我们揭示了很多细胞内分子活动的奥秘。尤其是单分子追踪（Single-particle tracking, SPT）技术，它能够精确地捕捉单个分子在细胞内的动态变化，为我们提供了以往无法获取的分子层面的信息。然而，这项技术的广泛应用面临着一个显著的挑战 荧光染料的光漂白现象。荧光染料在激光照射下逐渐失去荧光能力，这使得长期成像变得困难。特别是在细胞内复杂的分子相互作用研究中，如何克服光漂白成为了亟待解决的问题。

为了应对这一挑战，研究人员们不断探索新型荧光染料，以提高成像的稳定性和持续性。在这一背景下，1月15日Nature Methods的研究报道 Super-photostable organic dye for long-term live-cell single-protein imaging ，介绍了一种新型超光稳定的有机染料，凤凰荧光555（Phoenix Fluor 555，简称PF555）。PF555染料通过光漂白的方式从TSCy5染料中获得，表现出比传统荧光染料长十倍以上的光漂白寿命，且无需额外的抗光漂白添加剂，具有极高的光稳定性和亮度。

这项突破性研究不仅为长时程活细胞单分子成像提供了全新的解决方案，还为细胞内复杂分子动态的长时间观察开辟了新的道路。研究人员利用PF555染料成功地观察到了表皮生长因子受体（EGFR）与包裹有网格蛋白的结构（clathrin-coated structures）之间的长时间相互作用，捕捉到了以往无法通过传统方法发现的分子事件 EGFR内吞作用。这些发现不仅加深了我们对细胞内分子机制的理解，也为未来的生物医学研究提供了更强有力的技术工具。

PF555的超光稳定性、出色的亮度和长期成像能力，使其在细胞生物学、药物研发、疾病研究等领域具有广泛的应用潜力。通过这项技术，研究人员能够以前所未有的精度和持续时间，追踪单个分子在细胞内的动态变化，揭示细胞内复杂的分子交互过程。