黄连解毒汤，古老中药在现代炎症性肠病中的新突破!Front Immunol：HLJD通过抑制巨噬细胞Csf1r/Src通路及调节肠道菌群逆转顽固肠炎

黄连解毒汤，古老中药在现代炎症性肠病中的新突破！Front Immunol：HLJD通过抑制巨噬细胞Csf1r/Src通路及调节肠道菌群逆转顽固肠炎

来源：100医药网 2024-10-23 11:54

（UC）是炎症性肠病（IBD）的一种亚型，表现为黏膜炎症和出血，近年来其全球发病率上升，尤其在欧洲和北美地区。UC患者面临较高的风险，病因尚不明确，主要涉及遗传易感性、环境因素、失调和肠道微生物失调等。治疗UC的目标是减轻炎症和控制症状，通常使用糖皮质激素和免疫抑制剂，但长期使用可能导致严重副作用。传统中医药黄连解毒汤（HLJD）临床用于治疗腹泻和结肠炎，显示出良好的治疗效果，但其治疗机制仍不清楚。

近日，香港理工大学Xiao-Xiao Li研究团队在Front Immunol发表了题为Huang Lian Jie Du decoction attenuated colitis via suppressing the macrophage Csf1r/Src pathway and modulating gut microbiota的研究论文，发现黄连解毒汤能够通过抑制巨噬细胞的浸润、调节Csf1r/Src信号通路及其对肠道菌群的调控，显著减轻DSS诱导的小鼠慢性结肠炎症状，尤其是在高剂量下效果更为显著，这为黄连解毒汤在炎症性肠病中的临床应用提供了强有力的实验依据。

实验采用C57BL/6小鼠，随机分为5组：正常对照组（NC），HLJD组（2 g/kg，H），DSS诱导结肠炎组（DSS），DSS+HLJD低剂量组（2 g/kg，DHL），DSS+HLJD高剂量组（4 g/kg，DHH）。实验通过持续8周的DSS饮用水处理（5天DSS，2天饮用水）诱导小鼠慢性结肠炎，并从第2周开始给予不同剂量的HLJD。实验结束后，通过定期测量体重、粪便稠度、粪便出血等指标评估疾病活动指数（DAI），同时进行组织学分析、免疫荧光染色和基因表达检测。

首先，在体重和结肠长度的变化上，DSS组小鼠在8周实验期间体重显著下降，而接受HLJD治疗的组，特别是高剂量组（DHH），体重下降趋势被明显逆转。具体而言，与正常对照组相比，DSS组小鼠体重增加显著减少，但低剂量（DHL）和高剂量HLJD组在第5周至第8周期间逐渐恢复了体重增幅。与此同时，DSS组小鼠的结肠长度明显缩短，而DHL和DHH组的结肠长度得到显著恢复，尤其是DHH组，接近正常对照组的水平。这表明HLJD可以有效缓解DSS引起的结肠缩短和体重减轻等病理变化，特别是在高剂量时效果更为显著。

其次，粪便稠度和血便评分也得到了显著改善。DSS组小鼠从第5周开始粪便稠度急剧增加，表明小鼠粪便变得更加稀薄且难以成型，而在接受HLJD治疗的小鼠中，尤其是高剂量组，粪便稠度逐渐恢复至接近正常水平。此外，血便评分显示，DSS组小鼠在第8周时血便评分大幅增加，而DHH组小鼠的血便症状得到显著缓解，表现为血便评分显著降低。这表明HLJD特别是在高剂量下，对由DSS引发的肠道出血症状具有强有力的抑制作用。

图 1. HLJD煎剂改善了DSS诱导的小鼠模型中的慢性结肠炎状况

图 2. HLJD煎剂减轻了DSS诱导小鼠模型中的结肠损伤

组织病理学分析进一步证实了HLJD的治疗效果。DSS组小鼠的结肠组织显示出显著的炎症细胞浸润，隐窝结构损伤严重，黏膜层增厚，表明结肠存在广泛的组织损伤。然而，接受HLJD治疗的小鼠，尤其是DHH组，其结肠组织的炎症显著减轻，隐窝结构得以部分恢复。特别是在高剂量组，组织病理评分显著低于DSS组，表明HLJD对炎症性肠损伤的恢复具有显著效果。免疫荧光和免疫组化染色结果进一步表明，DSS组小鼠结肠中F4/80阳性巨噬细胞显著增加，表明大量炎症巨噬细胞浸润至结肠组织，而DHL和DHH组小鼠的F4/80阳性巨噬细胞数量显著减少，尤其是DHH组，这种炎症细胞的浸润被大幅抑制。这一现象与HLJD抑制巨噬细胞迁移和浸润的机制一致，表明HLJD能够有效抑制结肠中的炎症反应。

图 3. HLJD煎剂改善了DSS诱导的慢性结肠炎小鼠模型中的结肠炎症

基因表达分析进一步揭示了HLJD的抗炎机制。qPCR数据显示，DSS组小鼠中炎症因子肿瘤因子 （Tnfa）、趋化因子Cxcl1和Cxcl10的表达显著增加，而接受HLJD治疗的小鼠，这些炎症因子的表达水平显著降低，尤其是在高剂量组。此外，HLJD显著降低了结肠中Csf1r基因的表达，这是一种与巨噬细胞分化和炎症反应密切相关的基因。蛋白质水平检测结果显示，DSS诱导的小鼠中Csf1r蛋白表达水平上升，而HLJD处理后，特别是在DHH组，Csf1r蛋白表达显著下降。同时，DSS组小鼠中Src和磷酸化Src（p-Src）表达水平显著升高，而HLJD治疗，尤其是高剂量组，显著降低了p-Src水平。这些结果表明，HLJD通过抑制Csf1r/Src信号通路发挥了抑制炎症的作用。

最后，HLJD还通过调控肠道菌群进一步减轻了DSS诱导的结肠炎症。16S rRNA测序分析表明，DSS组小鼠的肠道菌群组成发生显著变化，其中一些与结肠炎症密切相关的菌群如Bacteroides、Odoribacter、Clostridium_sensu_stricto_1和Parasutterella在DSS组显著增加，而在HLJD治疗后，尤其是在高剂量组，这些有害菌群的丰度显著下降。同时，HLJD还增加了一些有益菌群的丰度，进一步支持其调节肠道微生态平衡的作用。相关性分析表明，结肠长度、脾脏重量百分比、粪便稠度、血便评分及疾病活动指数（DAI）等临床症状与特定菌群的丰度显著相关，进一步验证了肠道菌群在结肠炎症和HLJD治疗效果中的重要作用。

图 4. 不同群体肠道微生物群组成的改变

综上所述，黄连解毒汤在缓解DSS诱导的慢性结肠炎中发挥了显著的抗炎和免疫调节作用，其作用机制包括抑制巨噬细胞的浸润、调节Csf1r/Src信号通路以及改善肠道菌群失衡。特别是在高剂量下，HLJD的治疗效果尤为显著，为其在炎症性肠病中的临床应用提供了重要的实验依据。（100yiyao.com）

参考文献：

Su S, Liu T, Zheng JY, et al. Huang Lian Jie Du decoction attenuated colitis via suppressing the macrophage Csf1r/Src pathway and modulating gut microbiota.Front Immunol. 2024;15:1375781. Published 2024 Sep 26. doi:10.3389/fimmu.2024.1375781